1 引 言
由于羟基自由基的反应活性大、寿命短、存在浓度低,直接测定存在一定的难度。因此,建立快速、简便的测定方法,
对自由基理论研究和抗氧化药物筛选有重要意义。水杨酸、22脱氧2D2核糖和DMSO 是测定羟基自由基常用的分子探针。
其中,DMSO 与羟基自由基反应,主要的生成物有甲基亚磺酸( I) 及甲醛( II) 等。
·OH + (CH3 ) 2 SO CH3 SO2H B +·CH3 (1)
·CH3 + O2 CH3OO · (2)
2CH3OO · HCHO( II) + CH3OH + O2 (3)
有报道通过测定上述反应生成的甲基亚磺酸或来间接定量测定羟基自由基,也有利用Hantzsch 反应,以光度法测定
甲醛并探讨黄酮类化合物清除羟基自由基的研究。本文基于芬顿(Fenton) 反应产生的羟基自由基降解DMSO ,生成的甲
醛与盐酸肼反应(pH 6. 2) :
N2H4 + HCHO H2C = NNH2 ( III) + H2O (4)
产物Ⅲ于- 1. 08 V( vs. SCE) 处产一灵敏的二阶导数极谱波,建立了一种简便的间接测定羟基自由基及其消除的电化学
方法。该方法不需加热,常温下反应即可进行,耗时少,操作简便。
2 实验部分
211 仪器与试剂 MP-1 型溶出分析仪(山东电讯七厂) 。三电极系统:对电极为铂丝电极,参比电极为饱和甘汞电极;工
作电极为滴汞电极，HS2-2 酸度计,恒温水浴锅。抗坏血酸(Vc) 、氨基酸(生化试剂,北京试剂公司) ,其余试剂均为分析
纯,实验用水为亚沸二次蒸馏水。
212 实验方法 羟基自由基的产生:在5 mL 反应溶液中:pH 7. 4 KH2 PO4
2Na2HPO4 (50 mmolPL) 、DMSO(200μmolPL) 、Fe2
EDTA(1∶1 ,80μmolPL) 、H2O2 (120μmolPL) 、Vc (240μmolPL) ,将混合溶液于37 ℃水浴反应15 min。羟基自由基的测定:在上
述混合液中加入pH 5. 6 NaAc2HAc 缓冲溶液4 mL ,2 %盐酸肼1 mL ,摇匀,其溶液pH 为6. 2。放置5 min ,起始电位为
- 0180 V ,记录在- 1. 08 V 处二阶导数极谱峰电流。
3 结果与讨论
311 酸度对峰电流的影响 产物III 的峰电流随pH 增大逐渐增大,然后逐渐降低。当pH 为612 时,峰电流最大,故实
验选择pH = 6. 2。峰电位Ep 随pH增加而线性负移,线性回归方程为: Ep (V) = - 0. 700 - 0. 061pH ,表明质子参加了电极
反应,电极反应为:H2C = NNH2 + 2H + 2e H3C - NH - NH2 。
312 Fe3 + 2EDTA用量对峰电流的影响 改变Fe3 + 2EDTA(1∶1) 的用量,当溶液中Fe3 + 2EDTA 的浓度大于60μmolPL 时,峰
电流达到最大且稳定,实验选择Fe3 + 2EDTA 浓度为80μmolPL。
313 H2O2 用量对峰电流的影响 Fenton 体系本身可产生一定量的H2O2 ,另加入的H2O2 可以增加羟基自由基的生成
量。当H2O2 的浓度大于80μmolPL 时,峰电流最大且稳定。本文选择H2O2 的浓度为120μmolPL。
314 Vc 用量对峰电流的影响 Vc 在一定浓度下可将Fe ( III) 还原成Fe ( II) ,因此,可增加羟基自由基的产生量,但Vc 同
时又是羟基自由基的清除剂,用量过大反而会使羟基自由基的产生量减少。实验发现:Vc 浓度为240μmolPL 最佳。
315 盐酸肼用量对峰电流的影响 实验表明:2 %(V/ V) 盐酸肼用量在0. 6～1. 5 mL 之间,峰电流达到最大且稳定,实验
选盐酸肼的用量为110 mL。
316 方法准确度与精密度 当没有消除剂存在时,按实验方法,对于200μmolPL DMSO ,5 次测定的峰电流分别为1197、
2112、2104、2100 和2103μA;平均值为2. 03 , s = 0. 056 ,RSD = 2. 77 %。当消除剂葡萄糖存在时(116 mmolPL) ,5 次测定的峰
电流为1112、1107、1115、1109 和1113μA ,平均值为1111 ,s = 0. 032 , RSD = 2. 88 %。可见,本法具有良好的准确性与重现
性。
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